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什么是內(nèi)參？WesternBlot常用來(lái)比較不同條件下或不同細(xì)胞組織中目標(biāo)蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎(chǔ)。在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，可能因總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確，或是蛋白質(zhì)上樣時(shí)因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來(lái)進(jìn)行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細(xì)胞或組織間表達(dá)相對(duì)恒定，且有高水平的表達(dá)量，來(lái)確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱為內(nèi)參，對(duì)應(yīng)的抗體就稱為內(nèi)參抗體。內(nèi)參在WB實(shí)驗(yàn)中的重要性1用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定...

Q1:配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時(shí)能否有血清的存在？血清的存在會(huì)影響脂質(zhì)體的形成，建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時(shí)采用無(wú)血清培養(yǎng)基（一般推薦MEM培養(yǎng)基）。Q2:轉(zhuǎn)染試劑能否凍存？不能。本試劑一定要4℃保存，要注意避免反復(fù)多次長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋，長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。Q3:使用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么？1）細(xì)胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳；2）使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率；3）制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑；4）轉(zhuǎn)染的時(shí)候...

導(dǎo)讀FastBlockingWestern（快速封閉液）是最新一代的即用型、高效快速Western封閉液。封閉時(shí)間僅需10分鐘，效果優(yōu)于脫脂奶粉、BSA、酪蛋白等傳統(tǒng)封閉液，簡(jiǎn)化了Western實(shí)驗(yàn)方案。該試劑不含有哺乳動(dòng)物來(lái)源的蛋白成分，避免與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。該試劑可與磷酸化的抗體以及NC膜和PVDF膜兼容。PART01封閉原理轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，需對(duì)轉(zhuǎn)印膜進(jìn)行封閉。在轉(zhuǎn)印膜上未結(jié)合蛋白的位置，有許多非特異性的結(jié)合位點(diǎn)，為避免其與抗體發(fā)生非特異性結(jié)合引起高背景，需使用含有惰性蛋白...

1.Oligo（dT）Oligo(dT)是多聚胸腺嘧啶、T重復(fù)寡核苷酸，就是只有胸腺嘧啶組成的核苷酸鏈。因?yàn)镺ligo(dT)與mRNA的Poly(A)尾巴可以發(fā)生特異性結(jié)合，所以用Oligo(dT)特異結(jié)合到mRNA上Poly(A)尾端，因此，主要用于逆轉(zhuǎn)帶有Poly(A)尾的mRNA。例如模板為真核生物來(lái)源，Oligo(dT)可與mRNA的3’Poly(A)尾配對(duì)，有利于長(zhǎng)鏈或全長(zhǎng)mRNA的逆轉(zhuǎn)錄。但是，其對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不允許其降解，否則全長(zhǎng)cDNA合成量會(huì)...

mRNA疫苗相關(guān)產(chǎn)品-起發(fā)生物一、mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊：mRNA制備和脂質(zhì)微粒進(jìn)行包封mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊，可以類比為“原料藥”（mRNA）的生產(chǎn)和純化，以及“制劑”（利用脂質(zhì)微粒進(jìn)行包封）階段。原料藥（mRNA）生產(chǎn)涉及DNA原液制備和mRNA原液的制備，mRNA原液的制備（體外轉(zhuǎn)錄），是整個(gè)mRNA工藝流程中核心的步驟，而原料主要是酶。(一)mRNA疫苗的生產(chǎn)mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊，原料藥（mRNA）的生產(chǎn)以及制劑（利用脂質(zhì)微粒進(jìn)行包封）階段。mRN...

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀(jì)初，歷經(jīng)一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，現(xiàn)在已成為生命科學(xué)領(lǐng)域越來(lái)越重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。由于細(xì)胞的特殊性，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，或在細(xì)胞建株和建系過(guò)程中，隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞的各種生物特性都會(huì)逐漸發(fā)生變化。因此，原始細(xì)胞種子的及時(shí)保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過(guò)程中，雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存，是bi不可少的操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，在細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異...